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當前位置:首頁產(chǎn)品中心定量PCR試劑盒探針法熒光定量PCR試劑盒50T衣阿華支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

衣阿華支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品簡介

衣阿華支原體探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

更新時間:2020-09-29
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:444
產(chǎn)品型號:50T
詳細介紹在線留言

參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:衣阿華支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Mycoplasma iowae
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

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實驗過程:
一、衣阿華支原體探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2.產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:
97%25g5g11去澤瀉醇B68442331matrix metalloproteinase 11

(S)-10-羥基喜樹堿;10-羥基喜樹堿 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR (s)-10-hydroxycamptothecin

P選擇素(SELP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽)*250(g)

IMA(Human Ischemia Modified Albumin) ELISA Kit  人缺血修飾白蛋白CAS號:110156 葡萄糖氧化酶檢測試盒5mgHuman/人Elisa試盒3058397

99%10g25g1,3,5三羥基咕噸9002884matrix metalloproteinase 10

環(huán)星雜質(zhì)I 訂購|咨詢 規(guī)格: 50mg 牛結(jié)核桿菌菌體蛋白抗體 NUP54 ELISA Kit 54kDa核孔蛋白(NUP54)ELISA試劑盒

Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 ECD / Ecdysoneless homolog 蛋白 (His & GST 標簽)*250(g)

人Tie2BRPF3  BRPF3蛋白抗體規(guī)格:96T/48TAminobutanol規(guī)格:200mgCX3C趨化子;fractalkine檢測試盒20mg人宮頸癌細胞,HELAS3細胞1x10^6cells

雷藤; 雷公藤羰內(nèi)5羧基X羅丹明(單一化合物)5mg

正癸醇(Standard for GC,≥99.5%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC) n-Decyl alcohol

NTM Medium250肌原纖蛋白2檢測試盒5mg促狀腺激素檢測試盒Lipopolysaccharides

5(6)羧基X羅丹明(混合物)5mg

 小鼠淋巴瘤細胞英文名稱:EL4.IL-2

Thayer Martin Agar250抗組蛋白(H2AH2B)DNA抗體;抗二聚體DNA抗體檢測試盒5mg脂多糖檢測試盒1,25dihydroxyvitaminD3

6羧基四基羅丹明琥珀酰亞(單一化合物)5mg

琥珀二乙酯(standard for GC,≥99.6%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99.6%(GC) Diethyl succinate

YNB Medium100抗生長激素抗體檢測試盒5mg1,25二羥基維生素D3檢測試盒β(1,3)Dglucans
衣阿華支原體探針法熒光定量PCR試劑盒低聚果糖套裝(蔗果三糖;蔗果四糖;蔗果五 CAS號: 470699,13133078,59432609 規(guī)格: 0.25g*3 訂購|咨詢

維生素E(醋);純品型;標準品;有證 CAS號: 7695912 規(guī)格: 0.5g 訂購|咨詢

L天門冬氨;純品型;標準品;有證書 CAS號: 56848 規(guī)格: 0.1g 訂購|咨詢

D棉籽糖;純品型;標準品;有證書 CAS號: 17629300 規(guī)格: 0.25g 訂購|咨詢

L谷氨;純品型;標準品;有證書 CAS號: 56860 規(guī)格: 0.1g 訂購|咨詢

水楊;純品型;標準品;有證書 CAS號: 54217 規(guī)格: 0.1g 訂購|咨詢

低聚果糖蔗果五糖;純品型;標準品;有證 CAS號: 59432609 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

低聚果糖蔗果四糖;純品型;標準品;有證 CAS號: 13133078 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

低聚果糖蔗果三糖;純品型;標準品;有證 CAS號: 470699 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢

D麥芽糖;純品型;標準品;有證書 CAS號: 6363537 規(guī)格: 0.25g 訂購|咨詢

檸檬;純品型;標準品;有證書 CAS號: 77929 規(guī)格: 0.1g 訂購|咨詢

L亮氨;純品型;標準品;有證書 CAS號: 61905 規(guī)格: 0.5g 訂購|咨詢

D蘋果;純品型;標準品;有證書 CAS號: 636613 規(guī)格: 0.1g 訂購|咨詢

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乳糖;純品型;標準品;有證書 CAS號: 63423 規(guī)格: 1g 訂購|咨詢

 

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