細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 兔腮腺細(xì)胞

組織來(lái)源 腮腺組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 兔腮腺細(xì)胞分離自腮腺組織；腮腺是哺乳類動(dòng)物口腔中位于下頜角處的唾液腺，位于外耳道的前下方，下頜后窩內(nèi)及下頜支的深面。腮腺也是某些無(wú)尾目動(dòng)物頸部有毒皮膚腺的聚集體；唾液腺有3對(duì)，腮腺、舌下腺和頜下腺，其中的對(duì)是腮腺。腮腺細(xì)胞是高度分化的上皮源性細(xì)胞，是種營(yíng)養(yǎng)需要復(fù)雜、在般合成培養(yǎng)基中不易生長(zhǎng)，體外培養(yǎng)比較困難。目前，DMEM培養(yǎng)液被認(rèn)為較適于腺細(xì)胞的培養(yǎng)。加入定量的血清更有利于細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖與分化。另外，接種的細(xì)胞密度也是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵因素之，尤其是在腺細(xì)胞這種單層細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，接種的細(xì)胞總數(shù)量和生長(zhǎng)基質(zhì)表面的細(xì)胞密度對(duì)整個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)均有影響。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔腮腺細(xì)胞采用膠原酶-聯(lián)合消化后差速貼壁，結(jié)合上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的兔腮腺細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 兔腮腺細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。