商品屬性：

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 人源NK細(xì)胞（抗體分選/陰選）

組織來源 外周血

產(chǎn)品規(guī)格 1×10^6Cells/Vial

細(xì)胞簡(jiǎn)介 人源NK細(xì)胞分離自人外周血單個(gè)核細(xì)胞；NK細(xì)胞即自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell, NK）是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，能夠識(shí)別靶細(xì)胞、殺傷介質(zhì)。NK細(xì)胞來源于骨髓淋巴樣干細(xì)胞，其分化、發(fā)育依賴于骨髓及胸腺微環(huán)境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結(jié)。NK細(xì)胞不同于T、B細(xì)胞，是一類無需預(yù)先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的淋巴細(xì)胞。由于NK細(xì)胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細(xì)胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細(xì)胞的殺傷活性呈正相關(guān)。NK細(xì)胞作用于靶細(xì)胞后殺傷作用出現(xiàn)早，在體外1小時(shí)、體內(nèi)4小時(shí)即可見到殺傷效應(yīng)。NK細(xì)胞的靶細(xì)胞主要有某些腫瘤細(xì)胞（包括部分細(xì)胞系）、病毒感染細(xì)胞、某些自身組織細(xì)胞（如血細(xì)胞）、寄生蟲等，因此NK細(xì)胞是機(jī)體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，也參與第Ⅱ型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)。人源NK細(xì)胞的核心標(biāo)志物是CD3陰性（排除T細(xì)胞污染）且CD56陽(yáng)性；而CD19<5%、CD14<5%作為輔助排除B細(xì)胞、單核細(xì)胞污染，確保細(xì)胞群體單一性。從人體（血液/骨髓等）中直接分選的NK細(xì)胞，處于未激活狀態(tài)，此時(shí)細(xì)胞基本不具備體外增殖擴(kuò)增能力，殺傷能力較弱；體外經(jīng)過多種抗體、細(xì)胞因子分時(shí)段進(jìn)行激活刺激后，可轉(zhuǎn)入激活狀態(tài)，激活的NK細(xì)胞體外具備增殖擴(kuò)增能力，具備體外殺傷能力。本產(chǎn)品人源NK細(xì)胞（抗體分選/陰選）為未激活狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的人源NK細(xì)胞采用取外周血、密度梯度離心結(jié)合抗體分選法制備而來，細(xì)胞總數(shù)約1.25×10? cells/支，其中活細(xì)胞量>1×10? cells/支，細(xì)胞活率不低于80%。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人源NK細(xì)胞經(jīng)CD3-CD56+免疫熒光鑒定，純度可達(dá)80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 完培

培養(yǎng)基： 人源NK細(xì)胞（抗體分選/陰選） 培養(yǎng)基(含生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 懸浮

細(xì)胞形態(tài)： 圓形、類圓形

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 未激活，不可傳代

消化液： 無

人源NK細(xì)胞（抗體分選/陰選）體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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