細胞簡介：

產(chǎn)品名稱 人腎成纖維細胞

組織來源 腎組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人腎成纖維細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性維、前列腺素、激肽等，又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復(fù)有著十分重要的作用。腎成纖維細胞是腎臟結(jié)締組織中重要的細胞類型，在體外培養(yǎng)中，一般大致成梭形、多角形或不規(guī)則形等，為貼壁生長型細胞。剛分離的腎成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30 min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6 h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。其主要功能有：①組成過濾屏障內(nèi)壁的重要部分；②在炎癥和致血栓物質(zhì)的刺激合成必要的生物活性分子；③受損后影響系膜細胞和上皮細胞，進而影響腎臟病變。

方法簡介 實驗室分離的人腎成纖維細胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的人腎成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 人腎成纖維細胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 成纖維細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細胞處于對數(shù)生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養(yǎng)?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細胞電特性（如鈉電流）。