細胞簡介：

產(chǎn)品名稱 大鼠支氣管上皮細胞

組織來源 支氣管組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠支氣管上皮細胞分離自支氣管組織；支氣管（Bronchi），是指由氣管分出的各級分枝，由氣管分出的一級支氣管，即左、右主支氣管。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細長，走向傾斜；后者較粗短，走向較前者略直，所以經(jīng)氣管墮入的異物多進入右主支氣管。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是，氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細胞，還作為效應細胞合成、釋放多種炎性介質(zhì)和細胞因子，從而參與氣道炎癥及免疫反應。支氣管上皮細胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機制中均起著重要的作用。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性，因此，在基礎及臨床研究中極為重要。

方法簡介 實驗室分離的大鼠支氣管上皮細胞采用鏈霉-混合消化法結(jié)合機械刮刷并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的大鼠支氣管上皮細胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 大鼠支氣管上皮細胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 上皮細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數(shù)生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養(yǎng)?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細胞電特性（如鈉電流）。