細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞

組織來源 腦組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面（約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3）、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞，是哺乳動(dòng)物腦內(nèi)分布廣泛的一類細(xì)胞，也是膠質(zhì)細(xì)胞中體積大的一種。用經(jīng)典的金屬浸鍍技術(shù)（銀染色）顯示此類膠質(zhì)細(xì)胞呈星形，從胞體發(fā)出許多長(zhǎng)而分支的突起，伸展充填在神經(jīng)細(xì)胞的胞體及其突起之間，起支持和分隔神經(jīng)細(xì)胞的作用。細(xì)胞突起的末端常膨大形成腳板或稱終足，有些腳板貼附在鄰近的毛細(xì)血管壁上，因此這些腳板又被稱為血管足或血管周足，靠近腦脊髓表面的腳板則附著在軟膜內(nèi)表面，彼此連接構(gòu)成膠質(zhì)界膜。細(xì)胞剛分離時(shí)呈圓形，24 h后大部分細(xì)胞貼壁，均勻分布于瓶底，部分細(xì)胞伸出細(xì)小突起，培養(yǎng)4-5 d后細(xì)胞數(shù)量明顯增多，呈扁平、多角形，胞質(zhì)豐富且核漿較少，細(xì)胞核呈橢圓形，偏于胞體一側(cè)。神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要細(xì)胞組成，不僅具有支持功能，還能夠合成及分泌多種神經(jīng)活性物質(zhì)，在維持神經(jīng)元內(nèi)外環(huán)境、生存、遷移、免疫調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、軸突生長(zhǎng)及功能整合等方面具有重要作用。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑：0.25%、PBS、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基(含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代比例：1:2

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。