細(xì)胞簡(jiǎn)介：

細(xì)胞簡(jiǎn)介大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞分離自膀胱組織；膀胱是主要由平滑肌細(xì)胞組成的中空器官，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲(chǔ)存和排出尿液。膀胱平滑肌細(xì)胞表型的調(diào)控和可誘導(dǎo)一氧化氮合酶的表達(dá)與多種病理狀況有關(guān)，包括膀胱功能障礙。研究表明，組織缺氧抑制膀胱平滑肌細(xì)胞的增殖，膀胱平滑肌細(xì)胞的分化依賴(lài)于膀胱上皮細(xì)胞釋放的因子。膀胱平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)的分泌表型可通過(guò)細(xì)胞所經(jīng)歷的機(jī)械變形頻率而改變。平滑肌是許多疾病中的共同路徑，因此，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過(guò)程中平滑肌怎樣變化，這是治療方法取得進(jìn)展的重要一步。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)向外為粘膜層，肌層和外膜。逼尿肌為膀胱壁層肌肉的總稱(chēng)，由平滑肌構(gòu)成。分為三層，內(nèi)、外層為縱行肌，中層為環(huán)形肌。環(huán)狀肌最厚，堅(jiān)強(qiáng)有力。逼尿肌收縮，可使膀胱內(nèi)壓升高，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌，形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細(xì)胞不僅為組織工程膀胱、尿道提供種植細(xì)胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基礎(chǔ)與前提。

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱(chēng)大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞

組織來(lái)源膀胱組織

產(chǎn)品規(guī)格5×10^5Cells/T25

方法簡(jiǎn)介實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑：0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代比例：1:2

傳代特性：可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)

消化液：0.25%

凍存步驟：

?

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬圓環(huán)病毒2型IgG抗體(PCV2-IgG Ab)elisa定性檢測(cè)試劑盒    D-天冬氨酸氧化酶(DDO)重組蛋白

豬副豬嗜血桿菌5型(HPS-5)elisa定性檢測(cè)試劑盒    賴(lài)氨酰氧化酶樣蛋白4(LOXL4)重組蛋白

豬副豬嗜血桿菌12型(HPS-12)elisa定性檢測(cè)試劑盒    神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)重組蛋白

豬α狂犬病毒IgG抗體(PRV-IgG)elisa定性檢測(cè)試劑盒    脫羧酶2(GAD2)重組蛋白

豬藍(lán)耳病毒IgG抗體(PRRSV-IgG)elisa定性檢測(cè)試劑盒    二胺氧化酶(ABP1)重組蛋白

豬丹毒(erysipelas)elisa定性檢測(cè)試劑盒    NADH脫氫酶5(ND5)重組蛋白

豬丹毒絲菌抗體(myceliaceae-Ab)elisa定性檢測(cè)試劑盒    磷脂酶A2激活蛋白(PLAP)重組蛋白

豬藍(lán)舌病毒抗體(BLUV Ab)elisa定性檢測(cè)試劑盒    甲狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)重組蛋白

豬副豬嗜血桿菌4型抗體(HPS-4-Ab)elisa定性檢測(cè)試劑盒    腦啡肽酶(CD10)重組蛋白

豬副豬嗜血桿菌5型抗體(HPS-5-Ab)elisa定性檢測(cè)試劑盒    大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞價(jià)格周期素依賴(lài)性激酶2(CDK2)重組蛋白

豬副豬嗜血桿菌13型抗體(HPS-13-Ab)elisa定性檢測(cè)試劑盒    脫氫酶(GLDC)重組蛋白

豬札如病毒(Sapovirus)elisa定性檢測(cè)試劑盒    豐富重復(fù)激酶2(LRRK2)重組蛋白

豬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)抗原(Eg Ag)elisa定性檢測(cè)試劑盒    甲狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)重組蛋白

豬魏氏梭菌(Cl.welchii)elisa定性檢測(cè)試劑盒    苯羥化酶(PAH)重組蛋白

豬馬立克氏病毒抗體(MD-Ab)elisa定性檢測(cè)試劑盒    碳酸酐酶ⅤB(CA5B)重組蛋白

豬輪狀病毒抗體(rv-ab)elisa定性檢測(cè)試劑盒    碳酸酐酶ⅤB(CA5B)重組蛋白

豬柯薩奇3型病毒(Cox3V)elisa定性檢測(cè)試劑盒    組蛋白脫乙?；?(HDAC6)重組蛋白

作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。