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當前位置:首頁產(chǎn)品中心定量PCR試劑盒探針法熒光定量PCR試劑盒50T綠膿假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒

綠膿假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品簡介

綠膿假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。

更新時間:2020-09-30
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:482
產(chǎn)品型號:50T
詳細介紹在線留言

實驗步驟:
典型的PCR由
(1)高溫變性模板;
(2)引物與模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
【產(chǎn)品名稱】綠膿假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Pseudomonas aeruginosa
【產(chǎn)品編號】YSP7120
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測,所用儀器為實時熒光PCR儀,可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術(shù),針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計特異性引物和熒光探針,通過實時熒光一步法RT-PCR(Taqman探針法)對鴨源性成分核酸進行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細胞cDNA為模板,擴增β-actin基因,與同類產(chǎn)品相比,UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強,擴增效率更高。
?
PCR實驗方法步驟:
綠膿假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為:待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法,所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
99%100g25g3,4'O二基鞣花10458147Antiimmunobulin Binding Protein Antibody

 化十六基*銨瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格: 250g 用途: 用于綠膿桿菌及其它革蘭氏性非發(fā)酵菌的選擇性分離培養(yǎng)。(《中華人民共和國藥典》2010年版)

白介素10(IL10)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 蛋白 (Fc 標簽)*25000 mL/瓶

人內(nèi)皮素(ET1)GSTCD  谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶C段結(jié)構(gòu)域抗體規(guī)格:96T/48T規(guī)格:25mgα甘露糖苷酶檢測試盒20mg人胃癌細胞,MGC803細胞1x10^6cells

99%25g100g4,4'O二基鞣花34183227antigliadin antibody

澤瀉醇C-23-醋酯;澤瀉醇C單乙酯 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 Alisol C monoacetate

白介素1β(IL1β)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 CTRL-1 / CTRL / Chymotrypsin-like protease 蛋白 (His 標簽)*1000 mL/瓶

HRD(Human Hirudin) ELISA Kit  人水蛭素CAS號:1267397紫黃質(zhì)檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒3141240

98%25g25g透明質(zhì)酶Retro virus

鹽尼莫司汀  英文名稱:Nimustine hydrochloride   保存:-20℃   規(guī)格:30mg 絲氨/蘇氨蛋白激酶Plk1抗體

MMP7(Matrilysin/matrix metalloproteinases7)  基質(zhì)金屬蛋白酶7(抗原)*UDP葡糖醛基轉(zhuǎn)移酶1家族多肽A6檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒5006666

98%1g100g透明質(zhì)酶AlphaEndorphin

鹽賽洛唑啉 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR Xylometazoline hydrochloride 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeA-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株

MMP14(Matrix metalloproteinase14)  金屬基質(zhì)蛋白酶14進口、分裝UDP葡糖醛基轉(zhuǎn)移酶1家族多肽A9檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒5006666

98%500g500g膠原酶Kallikrein 9

蝙蝠葛蘇林堿 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 ELISA Kit for Human Perilipin-1大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒,英文名:IL-1sRⅡ ELISA Kit

DRCA食品和其他物質(zhì)中梭菌的計數(shù)和培養(yǎng)肌球蛋白ⅦA檢測試盒20mg熱休克蛋白90檢測試盒pregnancyassociatedplasmaproteinA
綠膿假單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒多紫杉三水(標準品)βAlanine,99%25G通用試劑

鹽多齊III型LAlanine ethlester hydrochloride5G通用試劑

鹽多齊III型(標準品)NωNitroLarginine methyl ester hydr...1G通用試劑

達馬莫德LCitrulline,≥98%5G通用試劑

鹽多佐;鹽杜塞酰DOrnithine HCL,98%500MG通用試劑

鹽多佐;鹽杜塞酰(標準品)LAspartic acid sodium salt,≥98%25G通用試劑

甲磺多沙唑嗪LAspartic acid Mg salt,≥98%100G通用試劑

甲磺多沙唑嗪(標準品)DAspartic acid,99%5G通用試劑

鹽多柔比星/鹽阿DLAspartic acid,≥99%25G通用試劑

鹽多柔比星/鹽阿(標準品)DLAsparagine monohydrate,≥99.0%25G通用試劑

鹽強力/鹽多西環(huán)素DGlutamic acid,≥99%5G通用試劑

鹽強力/鹽多西環(huán)素(標準品)LGlutamic acid monosodium salt hydrat...100G通用試劑

維生素K3,甲醌DLGlutamine,99%25G通用試劑

維生素K3,甲醌(標準品)DLIsoleucine,99%5G通用試劑

益康唑DLLeucine,≥99%10G通用試劑

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