腫瘤細胞轉(zhuǎn)染目前已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因表達的重要手段。本文整理了一些關(guān)于轉(zhuǎn)染實驗前的準備工作及一些實驗過程中的小貼士，希望這些信息能夠幫助各位科研君們做好轉(zhuǎn)染實驗及提高實驗效率。

① 從健康細胞開始
Ⅰ 轉(zhuǎn)染實驗前，細胞解凍后傳代3–4次。 這使得細胞從解凍過程中恢復(fù)過來，并恢復(fù)正常的生長速度。
Ⅱ 僅使用活性 >90%的細胞——使用臺盼藍染色可輕松測定細胞活性。
Ⅲ 定期傳代細胞，切勿讓細胞長到匯合狀態(tài)或過度生長。如果讓細胞長到匯合狀態(tài)，可能會改變細胞的生長速度以及形態(tài)。
a. 請在匯合率達到90%之前對細胞進行傳代。我們建議您使用胰酶替代物Cellstripper™試劑(Corning 25-056-CI)使細胞脫壁。Cellstripper™試劑可于室溫下存儲在通風(fēng)櫥中。可通過添加過量的Cellstripper™來跳過PBS洗滌的步驟，然后吸棄全部液體，僅留可覆蓋瓶子表面的液體。
* 非酶類細胞分離溶液，其配方是螯合劑的配方，可溫和分離組織培養(yǎng)物的貼壁細胞。性質(zhì)比胰酶更溫和。
b. 傳代條件取決于所用的細胞系。 部分經(jīng)驗法則：
對于快速生長的細胞，倍增時間為16小時(如HEK-293)，按1：10的比例分瓶。
對于生長緩慢的細胞，倍增時間為36小時(如原代細胞)，按1：5的比例分瓶。
Ⅳ 保留凍存的細胞系，并定期解凍新細胞。 傳代次數(shù)高(>30–40)時，細胞的生長速度和形態(tài)會改變。

② 進行實驗之前，請先規(guī)劃您的實驗。
務(wù)必要熟悉實驗方案、確定所需的材料量，并在開始實驗前確認所需的一切物品條件均已齊備。
Ⅰ 開始前，設(shè)計好鋪板路線圖，標注好每次處理或?qū)嶒灄l件。
Ⅱ 計算所需脂質(zhì)體和DNA的儲備量，并確認有足夠的下列材料：TransfectGRO減血清培養(yǎng)基(Corning 40-300-CVR)，Lipofectamine® 2000 或Lipofectamine® LTX試劑，以及DNA (0.5–1 µg/µL)。

③ 轉(zhuǎn)染時，請使用DNA。
Ⅰ 使用無內(nèi)毒素的試劑盒和實驗方案制備DNA。
Ⅱ 通過測量OD 260/280值來確定DNA純度，測得的OD值應(yīng)介于1.7–1.9]之間。數(shù)值過高或過低均說明有雜質(zhì)，腫瘤細胞不宜用于轉(zhuǎn)染實驗。
Ⅲ 在無DNA/RNA酶的水或TE中稀釋DNA。
Ⅳ 制備的工作濃度為0.5–1 µg/µL。 可用SpeedVac®濃縮儀或透析過濾裝置(例如，Millipore Amicon®超濾管)來濃縮DNA。
200mg    氨馬尿酸標準品    61-78-9    Aminohippuric Acid    氨馬尿酸標準品
200mg    氨魯米特標準品    125-84-8    Aminoglutethimide    氨魯米特標準品
200mg    氨甲環(huán)酸標準品    1197-18-8     Tranexamic Acid     氨甲環(huán)酸標準品
200mg    氨基己酸標準品    60-32-2    Aminocaproic Acid    氨基己酸標準品
200mg    氨芐青霉素三水酸標準品    7177-48-2    Ampicillin Trihydrate    氨芐青霉素三水酸標準品
200mg    氨芐青霉素標準品    69-53-4    Ampicillin    氨芐青霉素標準品
200mg    氨苯甲酸鈉標準品    555-06-6    Aminobenzoate Sodium    氨苯甲酸鈉標準品
200mg    氨苯甲酸鉀標準品    138-84-1    Aminobenzoate Potassium    氨苯甲酸鉀標準品
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